酶联免疫法精准检测E.coli宿主细胞蛋白
酶联免疫法（ELISA）作为一种灵敏度高、操作简便的技术手段，已被广泛应用于E.coli宿主细胞蛋白残留的检测。
酶联免疫法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA) 是一种基于抗原-抗体特异性反应的免疫学检测技术，包含双抗体夹心法、间接法、竞争法等。该方法通过将酶与特异性抗体或抗原相结合，实现对目标分子的高灵敏度检测。
在生物制药领域，ELISA常用于检测细胞培养上清液、发酵液或纯化样品中的宿主细胞蛋白，以确保药物产品的安全性和纯度。
酶联免疫检测原理
01
免疫原性
宿主细胞蛋白具有多种生理化学和免疫学特性的复杂混合物，可能会触发Toll-Like受体介导的先天免疫反应，或者直接由宿主细胞产生的细胞因子刺激机体，产生组胺，发生炎症反应。因此几乎所有HCP都有作为外来蛋白药物的临床安全风险。
02
类免疫佐剂作用
可以作为佐剂增加机体对治疗蛋白的免疫反应，及产生抗体“ADA”，从而直接影响药物在生物分布，药代动力学和生物活性。
03
影响产品稳定性
宿主细胞蛋白潜在的蛋白酶或“辅料酶”活性，可能导致产品稳定性下降，药效变化。并且其生物活性，可能导致药效变化。
美国药典
HCP残留量<0.01％（即1mg总蛋白中HCP含量应小于100ng，即100ppm)。 在上市申请前，应至少对3批注册批（如工艺验证批）进行定量检测，以证明纯化工艺的清除效果。 纯化工艺发生变更时，需重新开展清除验证研究。 美国药典（USP) 《mRNA药物的表征与放行测试》中推荐T7 RNA聚合酶、dsRNA等IVT体系残留的检测方法为ELISA。
中国药典
针对CHO细胞和酵母菌，HCP残留<0.05％，即500ppm，针对E.coIi，HCP残留需要<0.01％，即100ppm。 工艺相关杂质的质量控制通常在原液阶段进行。 如经充分验证证明生产工艺对工艺相关杂质的去除已达到高水平时，工艺相关杂质的质量控制可不列入常规放行检测。
酶联免疫法作为一种成熟、可靠的检测技术，在E.coli宿主细胞蛋白检测中发挥着重要作用。通过合理设计实验步骤和选择特异性抗体，该方法有助于提高生物制药产品的质量，保障患者用药安全。未来，随着生物技术的不断发展，酶联免疫法有望在更多领域发挥其优势，为人类健康事业贡献力量。
参考文献
[1].美国药典USP<1132>Residual Host Cell Protein Measurement in Biopharma-ceuticals
[2].《中国药典》（2020年版）：9012生物样品定量分析方法验证指导原则
[3].GB/T 33411-2016酶联免疫分析试剂盒通则
[4].YY/T 1183-2010酶联免疫吸附法检测试剂盒
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